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由制制商Genlantis公司以试剂盒款式供应Xi克隆(Genlantis 公司)Xi克隆,秤谌体表转录和翻译的表达载体用来将PCR产品定向克隆到高。 使酶失活后通过加热,载体(Aslanidis and de Jong 1990PCR产品通过复性连结到一个以近似方法爆发的含有单链尾巴的; al.1992Haun et;t al. 2009)Tachibana e。于转化大肠杆菌后当嵌合分子被用,酶将单链缺口封锁细菌细胞中的连结,闭合环状分子爆发一个共价。 一个变种中正在该技巧的,188bet体育靶DNA和载体的PCR引物重叠序列被打算引入用于扩增。(Hsiao 1993通过表切核酸酶II ;核酸酶活性对PCR产品和载体举办可控酶切消化爆发互补的出色3端Li and Evans 1997)或T4 DNA聚会酶的表切。 生死寻人 的序列是过程打算的载体和PCR产品,会出当今3端的前12个核苷酸中以担保四种碱基中的此中一种不。P生计的环境下正在这种dNT,核酸酶活性可能爆发指定长度的互补尾巴通过T4 DNA聚会酶的3→5表切。 流言侦探 的出色端稍微善于互补序列因为表切核酸酶的感化爆发,188bet手机登录官方网站一个舒展的单链间隙杂交体变成后将保存。188asiaA聚会酶I的Klenow 片断(行使T4 DNA聚会酶的环境下)修复这可能正在体内(行使表切核酸酶 II的环境下) 或正在体表用大肠杆菌DN。 倾向切除核苷酸这种酶正在3→5,私人侦探dNTP一致的第一个核苷酸直到它抵达与响应搀和物中的。基端掺入dNTP通过凹链的3羟,一步核酸表切消化被中和T4DNA聚会酶的进。
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